利用发酵,收集酵母菌体,用去离子水清洗三次,然后用含有不同金属离子和冻干保护剂的磷酸盐缓冲液重悬(50 mmol/L,pH 8.0),在经过预处理后,通过冻干机真空冷冻干燥可得到展示 RML 的毕赤酵母全细胞粉。
冻干机真空冷冻干燥前在菌悬液中添加一些保护剂,如山梨醇、蔗糖、果糖、海藻糖、葡萄糖、聚乙二醇、甘油等,能提高其活性和稳定性。这些物质在冻干过程中其羟基可与蛋白质中的极性基团形成氢键,代替蛋白质极性基团周围的水分子,使蛋白质表面形成一层假定的水化膜,保护氢键的连接位置不直接暴露在周围环境中,稳定蛋白质的高级结构,防止其因冻干而变性。
因此而知海藻糖、果糖和山梨醇等物质在冻干过程中能减少酶蛋白的变性,从而提高该酶的合成活力。与未处理的全细胞酶粉相比,冻干中加入这三种物质后,合成活力分别提高 17%、20.29%和 20.72%。
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